[摘要] 目的 探讨TCT、HPV-DNA及hTERC基因联合检测在宫颈癌筛查中的应用价值。 方法 对480例筛查者分别进行TCT、HPV-DNA和hTERC基因检测,并以病理学检测结果为参照标准,对三种检查方法的敏感度、特异度及符合率进行分析。 结果 480例受检者中,TCT检测异常49例,HPV阳性54例,hTERC基因扩增阳性29例。单一筛查时,TCT灵敏度最高,hTERC特异度和符合率最高;联合筛查时,TCT+HPV(+)灵敏度最高,HPV+hTERC(+)特异度和符合率最高,单项筛查和联合筛查的检出率均与病理级别有关(P<0.05)。 结论 联合检查应用于宫颈癌筛查中,优势较为明显,其中以HPV-DNA联合hTERC基因检测效果最为理想,检查结果均与宫颈高级别病变存在密切的关系。
[关键词] 宫颈癌;HPV-DNA;hTERC基因;联合检测;早期诊断
[中图分类号] R737.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2016)17-0009-04
The application value of combined detection of TCT, HPV-DNA and hTERC genes in screening of cervical cancer
ZHAO Runzhen
Department of Pathology, Fenyang Hospital of Shanxi Province, Fenyang 032200, China
[Abstract] Objective To study the application value of combined detection of TCT, HPV-DNA and hTERC genes in screening of cervical cancer. Methods 480 subjects were examined by TCT testing, HPV-DNA and hTERC genes detection. The sensitivity, specificity and coincidence rate of the three methods were studied with the results of pathological examination as the reference standard. Results In 480 subjects, abnormalities were found in 49 cases by using TCT testing, further, 54 cases were HPV-positive, and amplification positive PCR product of hTERC gene were detected in 29 cases. Single-arm screening results indicated that TCT had the highest sensitivity, and hTERC had the highest specificity and coincidence rate; by combined screening, the sensitivity of TCT+HPV(+) was the highest, while the HPV+hTERC(+) had the highest specificity and coincidence rate. Both single-arm screening and combined screening were correlated with histological grades, with statistical significance(P<0.05). Conclusion Combined examination has a remarkable advantage for the screening of cervical cancer over the single-arm screening, and the detection effect of HPV-DNA combined with hTERC gene is most evident. Besides, the inspection results are closely correlated the high levels of cervical lesions.
[Key words] Cervical cancer; HPV-DNA; hTERC gene; Combined detection; Early diagnosis
宫颈癌(cervical cancer,CC)是临床上常见的妇科恶性肿瘤之一,其发病率仅次于乳腺癌,我国每年大约近3万人死于宫颈癌[1-3],早期诊断对癌前病变的筛查和治疗及预防有着非常重要的意义,采用有效的检查方法是提高宫颈癌早期诊断正确率的关键,目前筛查宫颈癌已成为研究的热点[4]。随着宫颈细胞学在临床上得以广泛应用,如液基细胞学(TCT)、人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)和染色体端粒酶(hTERC)基因检测等[5],使得癌前病变的及早发现和早期治疗取得了很大的进展,宫颈癌的发病率和死亡率均得到明显下降[6]。hTERC基因检测是TCT和HPV检测方法的有力补充,三者联合有助于宫颈癌早期诊断和治疗后随访。本研究选取我院2013年4月~2014年12月期间接收的480例行宫颈脱落细胞学检查者作为研究对象,现将TCT、HPV-DNA及hTERC基因联合检测应用于宫颈癌筛查中的相关结果进行分析,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
以我院2013年4月~2014年12月期间接收的480例筛查者作为研究对象,均有性生活史,年龄24~61岁,平均(42.6±5.3)岁,排除存在宫颈活检和手术、上皮内瘤变和生殖系统恶性肿瘤疾病史以及妊娠期间和哺乳期的妇女。
1.2 仪器与试剂
本组研究均在筛选者知情下进行,所有仪器有离心机(包括冷冻高速离心机、八连管离心机和自动平衡离心机)、自动制片机、微量加氧枪、涡旋振荡器、电热恒温水浴箱和培养箱、荧光显微镜等;试剂除hTERC和HPV检测试剂盒外,固定液和乙醇均自行配制,包括甲醇冰醋酸、甲醛固定液和不同剂量乙醇(75%、85%、100%)。
1.3 方法
擦除宫颈表面分泌物后,以液基细胞毛刷取得柱状细胞和鳞状细胞间细胞,对样本同时行TCT、HPV-DNA、hTERC基因检测,避开月经期,若在采集过程中出现出血情况,应擦拭干净后再行采集,提前2 d通知筛选者,不可盆浴、阴道冲洗、有性行为以及自行用药,样本在4℃温度下保存,不能超过1周[7]。具体检测内容为:①TCT检查。按照TBS分类标准,明确WNL、ASC、AC、AG、SCC、LSIL、HSIL等内容,采用自动制片机制片,酒精固定后行巴式染色,对其进行细胞形态学分析。②HPV-DNA检测。采用SPR法,取样本1 mL,离心5 min,设置为12000转/min,DNA提取纯化,保存时应避免反复冻融;将PCR反应体系按照90 μL剂量置入扩增管中,加入样本DNA模板,混匀后配置扩增体系,依据指定程序完成扩增;将变性扩增产物进行上机检测,启动SPR检测程序,置入HPV生物传感芯片,对阳性对照、阴性对照及探针的信号值进行判读。③hTERC基因检测。采用EISH技术,将样本置入离心管中,离心10 min,设置为1500转/min,酶消化和低渗各30 min,离心前后分别加入2 mL、5 mL固定液,最后重复固定2次,玻片制备,并对其分别进行75%、85%、100%乙醇预处理,将配置好的变性探针混合液进行变性杂交,时间为16 h;复染,观察细胞核荧光杂交信号,以红、绿信号各为2个为正常,反之则为存在基因扩增,以正常检查者为对照,设定阈值,若扩增异常细胞比例高于阈值,提示为阳性,反之,则为阴性[8]。
1.4 统计学处理
以SPSS12.5软件包对收录数据进行统计处理,对联合检测的敏感度、特异度进行分析,并计算假阴、假阳和符合率,计数资料比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三种检测结果和活检病理结果
480例受检者中,TCT检测异常49例(占10.2%,49/480),不典型鳞状细胞(ASC-US)(图1)、不典型腺细胞(AGC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)分别为41例、4例、3例、1例;HPV阳性54例(占11.3%,54/480),高危型感染和低危型感染分别为47例7例,其中单一型32例,2种以上型22例;hTERC基因扩增阳性29例(6.0%,29/480),检测阈值为5。宫颈活检64例,其中正常范围(WNL)54例(占84.4%,54/64),鳞状上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)10例(占15.6%,10/64),按轻、中、重度不典型增生及病变累及的范围分3级:轻度不典型增生,即病变累及鳞状上皮下1/3(CINⅠ级,图2);中度不典型增生,即病变累及鳞状上皮的下2/3(CINⅡ级,图3);重度不典型增生,即病变累及宫颈鳞状上皮全层(CINⅢ级,图4)。HE×100。TCT检测异常及宫颈活检宫颈上皮内瘤变光镜观察见图1~4。
2.2 诊断性试验结果及与病理诊断结果之间的关系
单一筛查方法中,灵敏度从高到低排列依次为TCT、HPV、hTERC,分别为82.9%、74.8%、64.1%;特异度从高到低排列依次为hTERC、TCT、HPV,分别为82.0%、54.0%、54.0%;假阴性率从高到低排列依次为hTERC、HPV、TCT,分别为36.2%、25.5%、16.8%;假阳性率从高到低排列依次为HPV、TCT、hTERC,分别为56.8%、46.2%、18.0%;符合率从高到低排列依次为hTERC、TCT、HPV,分别为79.2%、59.0%、48.5%。
联合筛查中,灵敏度从高到低排列依次为TCT+HPV、TCT+hTERC、HPV+hTERC,分别为94.5%(453/480)、89.0%(427/480)、86.2%(414/480);特异度从高到低排列依次为HPV+hTERC、TCT+hTERC、TCT+HPV,分别为86.6%(416/480)、80.2%(385/480)、30.2%(145/480);假阴性率从高到低排列依次为HPV+hTERC、TCT+hTERC、TCT+HPV,分别为14.0%(67/480)、11.2%(54/480)、5.8%(28/480);假阳性率从高到低排列依次为TCT+HPV、TCT+hTERC、HPV+hTERC,分别为70.5%(338/480)、20.2%(97/480)、13.5%(65/480);符合率从高到低排列依次为HPV+hTERC、TCT+hTERC、TCT+HPV,分别为86.4%(415/480)、81.8%(393/480)、40.0%(192/480)。见表1。
无论是单项筛查还是联合筛查,检出率均随着病理级别的升高而逐渐升高,不同病理级别检出率比较差异有统计学意义(P<0.05),表明三项检查均与宫颈高级别病变存在密切的关系。
3 讨论
宫颈癌(CC)是妇科最为常见的一种恶性肿瘤,与高危型HPV持续感染直接相关,从慢性宫颈炎、宫颈鳞状上皮内瘤变(CIN)直至进展演变成为宫颈鳞癌是一种多因素共同作用的复杂病理过程[9],探明宫颈鳞癌癌变过程中的生物学机制及其相关影响因素,能为宫颈癌的早发现,治疗提供有价值的帮助[10]。由于CC患者在发病初期并无明显症状和体征,并未引起注意,宫颈外观并无明显异常,在临床检查过程中漏诊和误诊情况也时有发生,多数患者病变诊断后癌症已经发展到中晚期,给治疗带来了很大难度,生命安全受到严重威胁[11]。随着医学科学技术的的发展,细胞病理学检测技术取得了巨大进展,新的报告方式TBS及采用描述性诊断和满意度评估,逐渐替代传统的巴氏分类法[12]。
在临床工作中,HPV灵敏度较TCT高。HPV-DNA灵敏度达97%,而TCT特异性达87%。我们的体会:①HPV-DNA灵敏度和阴性预测值,可回归到正常人群管理;②HPV-DNA目的是发现真正高风险人群而非单纯HPV感染。③若TCT(-),HPV(+),每年要重复筛查;应视为细胞学漏诊,漏诊者中约1/3,HPV16/18(+),关于HPV16(+),每8例就有一个漏诊,它发生CINⅡ以上的机率为13.6%,HPV18(+)发生CINⅡ以上的风险为7%。④HPV(+),检测不同级别CIN,早期发现HSIL。HPV(+)发生CIN1机会高3.8倍,发生CIN2-3的机会高12.7倍。
hTERC该基因的异常扩增可能是宫颈癌形成的早期事件,hTERC基因的阳性表达率随着细胞学分级的递增而增加且与高危型HPV的持续感染密切相关,hTERC与TCT两者联合检出宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞癌的比率高于单独使用TCT检测的比率。hTERC基因扩增可能促进了肿瘤的发展,与病变程度呈正相关。本文结果显示hTERC基因可作为宫颈癌的生物学标志,用于宫颈癌的筛查,早期诊断与文献报道一致[13-15]。
TCT、HPV-DNA和hTERC基因检测现已成为CC筛查的主要检查方法,但是单项筛查效果仍不十分理想,为进一步提高CC病变的检出率,联合筛查方案在临床上得以广泛应用,其效果也获得了充分的肯定,研究显示,不同检查结果均与宫颈高级别病变存在密切的关系,其中以HPV-DNA联合hTERC基因检测效果最为理想,建议作为首选筛查方案,在临床上加以推广。
[参考文献]
[1] Zhou J,Ran J,He Ze,et al. Taildring pelvic lymphadenectomy for Patients with stage IA2,IB1,and IIA1 uterine cervical cancer[J]. J Cancer,2015,6(4):377-381.
[2] Chen CC,Wang L,Lin JC,et al. The prognostic factors for locally advanced cervical cancer patients treated by intensity-modulated radiation therapy with concuryent chemotherapr[J]. Formos Med Assoc,2015,114(3):231-237.
[3] Ghadjar,Budach V,Kohler C,et al. Modem radiation therapy and potential fertility preservation strategies in patients with cervical cancer undergoing chemoradiation[J].Radiat Oncol,2015,10(1):353.
[4] 韩翠兰. 利普液基制片技术在宫颈病变诊断中的价值[J].中国现代药物应用,2010,4(15):84-86.
[5] 回允中. 外科病理学[M]. 北京:北京大学医学出版社,2006:1530-1548.
[6] 董有伟,娄阁. 液基细胞学、HPV检测及hTERC、C-myc基因检测在宫颈癌筛查中的临床应用[J]. 中国肿瘤,2013,15(7):547-550.
[7] 王晓娜. HPV基因型分布及液基细胞学联合HPV分型检测和HPV16DNA整合状态在宫颈病变筛查和诊治中的应用价值[D]. 河北医科大学,2013.
[8] 路光明,南玉勇,张冬青. 薄层液基细胞学联合HPV-DNA检测对宫颈癌筛查的临床价值[J]. 中国妇幼保健,2014,29(11):5002-5004.
[9] 陈乐真. 妇产科诊断病理学[M]. 北京:人民军医出版社,2002:116-124.
[10] 胡建兵,刘静,谢文,等. Teis、E-cadherin、及Vimentin在宫颈鳞状细胞癌变的表达及意义[J]. 中国医师杂志,2012,14(4):473-476.
[11] 李云. 液基细胞学联合HPV基因分型检测在宫颈癌前病变筛查中的应用探讨[J]. 中外医疗,2015,13(7):8-9.
[12] 邹大喜. 宫颈细胞学传统制片与液基制片在宫颈病筛查中的应用价值[J]. 中国妇幼保健,2013,28(28):4735-4737.
[13] Garaway NP,khanna A. Gain of the 3q26 region in cervicovaginal liquid-based pad prepar-ations is associated with squamous intraepithlial lesions and squamous cell carcinoma[J]. Gynecol,2008,110(1):37-42.
[14] 段清,马鸿达,杨维娜,等. 应用荧光原位杂交法检测宫颈脱落细胞中hTERC基因的扩增[J].天津医药,2009,37(6):489-491.
[15] 卫立辛,吴孟超. 端粒酶:肿瘤治疗研究的新希望[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志,2006,13(5):325-328.
(收稿日期:2016-04-28)