【摘要】目的探讨液基细胞学检查(LCT)、人乳头瘤状病毒(HPV-DNA)检测及两种联合检测对宫颈癌筛查的临床诊断价值。方法用人乳头瘤状病毒(HPV-DNA)检测和液基细胞学测试(LCT)对1565例患者进行了宫颈筛查,最后结合阴道镜活检组织病理结果作为诊断结果。结果在对高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)的检测中,HPV-DNA与LCT的敏感性分别为94.26%、90.98%,特异性分别为81.39%、81.11%,而联合两种检测方法几乎可以筛查出所有的CINⅡ以上的病变,敏感性高达99%,明显提高了宫颈病变的检出率。结论HPV-DNA和LCT检测常用于宫颈癌筛查,联合应用能显著提高筛查效率。
【关键词】宫颈肿瘤;人乳头状瘤病毒(HPV-DNA)检测;薄层液基细胞学;筛查
The clinical value of liquid-cytology test(LCT) and human papilloma virus(HPV-DNA) for cervical cancer screening HUANG Chuan-ying.The Peoples Hospital of Guigang City, Guigang 537100,China
【Abstract】ObjectiveTo dicuss the clinical value of liquid-based cytology test(LCT),human papilloma virus(HPV-DNA) and their combined analysis for cervical cancer screening.MethodsUsing two ways of HPV-DNA and LCT to check 1565 womens cervixs,which combined the results of colposcopy biopsy as the final diagnosis in screening cervical cancer.ResultsIn the high-grade examination of cervical intraepithelial neoplasia(CIN),the sensitivity of HPV-DNA and LCT were 94.26%, 90.98%,their specificity were 81.39%,81.11%,and combine two methods,which almost can screening above all of CINⅡpathological changes,their sensitivity can high to 99%.It improved the detection rate of cervical pathological change obviously.ConclusionBoth HPV-DNA test and LCT are valuable for screening cervical cancer.The combined detection by HPV-DNA test and LCT can significantly improve the detection rate in cervical cancer screening.
【Key words】Cervix neoplasms;Human papilloma virus test(HPV-DNA);Liquid-bases cytology;Screening
子宫颈癌是一种常见的妇科肿瘤,宫颈癌的癌前病变期是较长可逆的,宫颈癌早期诊断及治疗已被流行病学研究和临床研究重点关注。目前普遍认为人乳头瘤状病毒感染是引起宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的主要原因[1],所以常用人乳头瘤状病毒感染(HPV-DNA)检测的方法来筛查宫颈癌,同时以液基细胞学检查(LCT)方法进行辅助筛查。现讨论HPV-DNA检测和LCT及其组合在宫颈癌筛查中的临床价值,从而达到宫颈癌的早诊早治。
1资料与方法
1.1一般资料选择2010年7~12月在贵港人民医院妇产科住院及门诊进行宫颈癌筛查和诊治的1565名妇女,年龄16~68岁,72%年龄集中在20~45岁。1565例均同时进行宫颈脱落细胞的液基细胞学检查(liquid-based cytological test,LCT)和人乳头状瘤病毒(HPV-DNA)检测。标本采集前3 d内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗,24 h内无性行为,样本采集在非月经期进行。
1.2取材使用凯普生物技术有限公司的一次性宫颈细胞采取器。首先,用扩阴器暴露宫颈口,再用棉拭子将宫颈口过多的分泌物拭去;然后将宫颈刷伸入宫颈口处,轻轻搓动宫颈刷使其顺时针转3~5圈;缓慢取出宫颈刷,将其放入装有细胞保存液的样本管中;在管口处将多余的刷柄折断,将刷头保留在样本管中,旋紧管盖,并在样本管上注明日期、姓名和编号等。
1.3研究方法
1.3.1HPV-DNA检测采用凯普公司HPV-DNA导流杂交检测技术[2],可以一次检测21个HPV的型别,其中5个低危型HPV(6、11、42、43、44)和16个高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、81)。
1.3.1.1DNA提取(1)将临床标本震荡混匀,伸入采集管底部吸取临床标本500 ml置离心管,14 000 r/min离心5 min;(2)将上清液倒入废液缸,加入400 μl DNA提取溶液Ⅰ置离心管中,震荡混匀,100 ℃加热15 min;(3)点动离心后,加入400 μl DNA提取溶液Ⅱ,震荡混匀,静置2 min,14 000 r/min离心5 min;(4)将上清液倒入废液缸中,在14 000 r/min离心1 min,用200 μl的移液器将剩余上清液吸干净,开盖静置2 min;(5)加入60 μl DNA溶解液,震荡混匀,静置10 min,14 000r/min离心5 min;(6)吸取上清液1 μl加入凯普分装好的PCR反应试剂管中,点动离心,放入PCR仪中扩增。
1.3.1.2DNA杂交(1)按自下而上的顺序放好金属板、分隔膜、杂交膜、硅胶圈、分隔室、压扣盖,将杂交仪温度设定为45 ℃,加入杂交液800 μl,进行预杂交2 min;(2)将杂交液排干,加入500 μl杂交液,将变性好的PCR扩增产物依次加入反应槽中,杂交10 min;(3)将温度调至25 ℃,并将杂交液排干,加入800 μl杂交液,排干,重复3次清洗杂交膜;(4)加入500 μl封阻液,预封阻,待温度降到30 ℃时排干,再加入500 μl封阻液,封阻5 min;(5)排干封阻液,加入酶标液500 μl,酶标3.5 min;(6)将温度调至36 ℃,并排干酶标液,加入800 μl洗涤液A,排干,重复4次清洗酶标液,加入500 μl显色液,显色3~5 min;(7)排干显色液,加入800 μl洗涤液B,排干,重复3次,加入蒸馏水清洗。
1.3.1.3结果判定图1左上角第一点为生物素点,下面的为IC点,这两点为对照点。染色后出现对应的点,就为相对应的型别,图2结果为16型别。如果出现多个点,说明是混合感染,图3为16、33、53、66型别的混合感染。
1.3.2液基细胞学检查采用国产宏强液基薄层制片机自动制片及染色,再用光学显微镜进行检查。如果HPV实验结果不明的情况下,采用TBS分级系统的诊断标准,即:(1)正常范围(Within nomal limits,WNL);(2)意义不明的不典型鳞状细胞(ASCUS);(3)低度鳞状上皮内病变(LSIL);(4)高度鳞状上皮内病变(HSIL);(5)宫颈癌(SCC)[3]。仍采用细胞学和组织学相对应的诊断术语,LSIL即CINⅠ,HSIL包括CINⅡ和CINⅢ。细胞学诊断是指ASCUS及其以上的病变。
1.3.3组织病理学检查对LCT和HPV-DNA检查方法中,其中任意一种或两者结果异常者,在阴道镜下对病变处碘实验不着色区进行多点活检,正常转化区则取3、6、9、12点活检
2结果
2.1LCT检测结果与组织病理学结果的关系LCT和HPV-DNA检查方法中其中任意一种或者两者结果异常者共计734例患者进行阴道镜下活检,获得组织病理学结果,详见表1。
2.2LCT、HPV-DNA结果与组织病理学结果的关系以组织病理学检测结果≥CINⅡ为阳性标准,以≤CINⅠ为阴性标准;以LCT检测结果≥ASC-US为阳性标准,以≤炎症或者正常为阴性标准;进行LCT与HPV-DNA敏感性计算,详见表2和表3。
2.3LCT与HPV-DNA两种检测方法的比较Shenman等发现当宫颈细胞学检查和HPV检查结果都是阴性的累积发病率仅为0.79%,这些病例检查均为无CIN及宫颈病变,据此笔者将两种检测结果均为阴性的831例妇女认定为无CIN及宫颈病变,未进行组织病理学检查。详见表4。在此基础上计算两种检测方法的临床应用价值。
3讨论
随着临床对HPV与宫颈癌关系的广泛重视,报道HPV感染是宫颈癌发病的主要原因:美国癌症学会2004年宫颈癌普查最新指南指出[4],30岁之前应每年1次常规宫颈细胞学检查或每两年进行一次TCT检查,直至连续3次细胞学检查结果正常或阴性,则改为2~3年普查1次,70岁以上妇女,如果连续3年以上细胞学检查结果正常或阴性,同时在70岁以前的10年里没有异常或阳性细胞学检查结果,可以选择停止宫颈癌的普查。但对原因不明的阴道炎症、过早性生活、多性伴侣、HPV感染等高危人群,应定期进行宫颈细胞学检查及HPV检查。HPV检测方法也在不断改进。HPV-DNA检测在筛查宫颈癌的敏感性和特异性都比较高,其敏感性为96%以上,特异性80%以上。随着宫颈病变程度的升高,其HPV感染率呈上升趋势,其筛查高级别宫颈上皮内瘤变(CIN) 的敏感性和特异性均较高,其阳性似然比为6.7,阴性似然比为0.02,说明检测阳性时患高级别宫颈上皮内瘤变的风险为非高级别病变的6.7倍;而检测阴性时几乎无错误判断的可能性。但值得注意的是HPV感染非常普遍,许多妇女可以被发现高危型HPV-DNA 阳性,尤其是在青年妇女中更加常见,但是会发展为宫颈癌或者高级别癌前病变的概率还是很小的。在广泛的筛查中发现10%~20%的成年人会有暂时性、无临床意义的HPV感染,即使把HPV检测限制于20~30岁的妇女,仍然会有5%~15%的妇女呈现暂时性、高危型HPV阳性。因此,单纯HPV阳性不代表宫颈癌的发生,但是HPV感染是宫颈癌发生的必要条件,定期检测HPV能有效地判断宫颈癌发病风险。
参考文献
[1]Munoz N,Bosch FX,De Sanjose S,et al.Epidermiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J].N Eng J Med,2003,348(6):518-527.
[2]卞美璐.HPV多重感染与宫颈病变关系探讨[J].中国妇产科临床杂志,2006,3(7):88.
[3]马博文,郭云泉,马丽丽.液基细胞学技术对宫颈上皮细胞异常筛查作用的研究[J].中华病理学杂志,2004,33(3):287
[4]刘向阳,冯飞跃,赵守华.美国癌症学会[ACS]2004年版癌症早期筛查指南解读[J].中国医刊,2004,39(7):49.
【收稿日期】2011-09-11