高中生物选修一 教
案
高二生物备课组集体备课教案
专题一
传统发酵技术的应用 课题1 1 果酒和果醋的制作 一、三维目标 (一)知识与技能 1.了解传统发酵技术在日常生活中的应用。
2.掌握发酵作用的基本原理和方法。
3.学习制作果酒、果醋的实际操作技能。
4.设计并安装简单的生产果酒及果醋的装置 (二)过程与方法 1.引导学生主动参与探究过程,培养学生搜集和处理科学信息的能力,获取新知识的能力以及用简约科学术语表达问题的能力。
2.培养学生综合分析能力。
3.培养学生利用已建立的知识解决实际问题的能力。
(三)情感、态度与价值观
1.对学生进行科学方法和科学态度的教育。
2.体验和感受生物技术给人类生活带来的变化。
3.培养学生合作精神。。
二、教学重点说明果酒和果醋的制作原理,设计制作装置,制作出果酒和果醋 三、教学难点制作过程中发酵条件的控制 四、教学方法启发式教学 五、教学工具多媒体课件 六、教学过程 (一)引入新课 俗语“无酒不成席”、“开门五件事、油盐酱醋茶”。酒和醋是人们日常生活离不开的传统发酵产品。从这节课开始,我们以果酒、果醋等为例学习一些传统发酵技术。
(二)进行新课 (阅读“果酒制作的原理”,引导考学生自学基础知识。)
1 1 .基础知识 1.1 果酒制作原理 (1)利用的微生物是酵母菌,其异化作用类型是兼性厌氧型,明确酵母菌发酵的反应式:①有氧条件:
②无氧条件:
(2)影响酒精发酵的主要环境条件有温度、氧气和pH。
①酒精发酵是一般将温度控制在18~25℃范围内,在20℃时最适宜。
②酒精发酵过程中,要保持缺氧、酸性环境。
(阅读教材资料,师生讨论并完成思考1~4。)
〖思考1〗为什么在酒精发酵过程中往往“先通气后密封”? “通气”的目的是使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖
。
“密封”的目的是使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精 。
〖思考2〗酒精发酵过程中发生“先来水后来酒”现象,其原因是什么? 酵母菌首先进行有氧呼吸产生了水,然后进行无氧呼吸才产生酒精。
〖思考3〗葡萄酒呈现深红色的原因? 在发酵过程中葡萄皮的色素进入到发酵液中。
〖思考4〗酵母菌是如何进行生殖的? 酵母菌在环境适宜时进行出芽生殖,环境不适宜时产生孢子进入休眠状态。
(阅读果醋制作的原理,引导考学生自学基础知识)
1.2 果醋制作原理 (1)利用的微生物是醋酸菌 ,其异化作用类型是需氧型。在氧气和糖源都充足时,降糖分解形成醋酸;当缺少糖源时可将乙醇转变成乙醛,并进一步转变成醋酸。明确醋酸发酵的反应式。
(2)醋酸发酵的最适宜温度为 30~35 ℃。
(师生讨论并完成思考5~6)
〖思考5〗影响醋酸发酵的环境因素还有哪些?氧气和pH。
〖思考6〗醋瓶子、未喝干的啤酒瓶子放置久了,在醋和啤酒表面形成一层“白膜”。它是怎样形成的?醋酸菌大量繁殖形成的。
2 2 .实验设计 2.1 实验流程 课件展示流程图 (讨论并完成思考7,提问)
〖思考7〗酒精发酵和醋酸发酵的区别和联系:
(阅读[资料],学生讨论完成发酵过程的设计。)
2.2 设计发酵装置:根据图1-4a、4b回答 (1)在酒精发酵过程中,每隔一段时间(12h)拧松瓶盖或打开排气口,其原因是什么? 在发酵过程中产生CO2 ,防止瓶内气压过高引起爆裂。
(2)在醋酸发酵过程中,需要注意什么? 要持续向发酵液中补充氧气。
(3)在图1-4b装置中:
①充气口的作用是在 醋酸 发酵中补充氧气; ②排气口的作用是在发酵中排出 CO2或残余气体 ; ③出料口的作用是便于 取样检查和放出发酵液 ; ④排气口胶管长而弯曲的作用是防止 防止空气中杂菌感染 。
3 3 .发酵操作 3.1材料选择和处理 区别 酒精发酵 醋酸发酵 微生物
温度
氧气
联系 酒精发酵为醋酸发酵提供____________。
选择新鲜优质的葡萄,然后依次冲洗、除去枝梗和榨汁。
〖思考9〗先冲洗后去枝梗的目的是什么? 防止杂菌感染 。
3.2 防止发酵液被污染 为防止发酵液被杂菌污染,实验中所用的 榨汁机 、 发酵装置 等器械进行消毒,并使发酵装置处于 封闭 状态。
〖思考10〗在实际生产中,还要对发酵液进行煮沸处理,其目的是什么? 消灭发酵液中的杂菌 。
3.3 控制发酵条件 (1)发酵液装瓶后保持 1/3 的剩余空间。
(2)酒精发酵的温度要控制在 18~25℃ 范围内,发酵时间控制在 10~12 天左右。
(3)醋酸发酵的温度要控制在 30~35℃范围内,发酵时间控制在 7~8 天左右,并保持不断充气 。
(学生分组讨论并完成思考11~12)
〖思考11〗在发酵液装瓶后问什么要保持1/3的剩余空间? 暂时存储发酵产生的CO2,起到缓冲作用。
〖思考 12〗在醋酸发酵过程中需要向发酵液中补充氧气,你认为最经济实用的方法是向发酵液中通入 无菌空气 。
4 4 .结果分析与评价 4.1实验现象:
4.2 检验:
酒精发酵后是否有究竟产生,可用 重铬酸钾 来检验。
(1)原理:在酸性条件下 重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。
【补充】为了控制和了解发酵进程,不断进行取样检查,其中检查的项目有原料浓度、产物浓度、发酵菌含量、溶氧量和pH等。
(2)方法:(填表,注意对照原则)
5 5 、相关链接 为了提高果酒和果醋的产量和品质,抑制其他微生物的生长,还应直接向发酵液中加入人工培养的优良菌种 。
(三)课堂总结、点评 发酵 酒精发酵 醋酸发酵 气味和味道
气泡和泡沫
发酵液颜色 混浊 混浊,液面形成白色菌膜 操作 试管甲 试管乙 发酵液 2mL - 蒸馏水
3mol/LH 2 SO 4
饱和重铬酸钾溶液
现象
本节课主要学习了以下几个问题:
1.果酒和果醋制作的原理 2.制作果酒和果醋的实验流程 3.实验操作中的注意事项 4.实验结果分析与评价 学生应当重点掌握果酒和果醋制作的原理,并且学会分析操作过程中注意的问题。通过小组讨论、联系生活来提高合作探究的能力,并且增强学习生物学的兴趣。
(四)实例探究 例1.生产果醋用的醋酸菌等细菌都具有的特征是
(
)
A.都是异养生物
B.仅在有水条件下繁殖 C.仅在有氧条件下生长
D.生存温度都超过80℃ 解析:细菌的生长所必需的营养元素:碳源、氮源、无机盐、水生长因子,其中碳源、氮源、无机盐、生长因子因细菌种类的不同,所需的种类也不一样,而水是所有微生物生长共同所需要的物质。细菌按同化作用可分为自养型和异养型两种;按异化作用可分为需氧型和厌氧型。答案:B 例2.发酵过程中,不会直接引起pH变化的是 A.营养物质的消耗
B.微生物呼出的CO2 C.微生物细胞数目的增加
D.次级代谢产物的积累 解析:微生物发酵过程中,微生物的代谢会消耗大量的营养物质,可能造成酸碱物质消耗不均,从而引起 pH 的变化;微生物的呼吸作用还会产生大量的 CO2 引起 pH 的变化;同时产物的种类也能引起pH的变化。答案:C
☆综合应用 例3.在啤酒生产过程中,发酵是重要环节。生产过程大致如下:将经过灭菌的麦芽汁充氧,接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期,酵母菌迅速繁殖,糖度下降,酒精浓度渐渐上升,泡沫不断增多。当糖度下降到一定程度后,结束发酵。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程,回答以下问题:
(1)该过程表明啤酒酵母异化作用的特点是
。
(2)初期,酵母菌迅速繁殖的主要方式是
。
(3)酒精主要是啤酒酵母菌进行
作用产生的代谢产物。
(4)经测定酵母菌消耗的糖中,98.5%形成了酒精和其它发酵产物。其余 1.5%则用于
。
(5)请写出由麦芽糖→葡萄糖→酒精的反应方程式。
解析:酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸,在无氧条件下进行无氧呼吸,有氧时酵母菌能通过出芽生殖的方式大量繁殖,种群数量增加很快,无氧时能分解糖类产生酒精,释放出的能量,大部分储存在发酵产物中,极少数用于自身生长发育。
答案:(1)既能进行有氧呼吸又能进行无氧呼吸 (2)出芽生殖
(3)无氧呼吸
(4)自身的生长繁殖 (5)C 12 H 22 O 11 +H 2 O→2C 6 H 12 O 6
C 6 H 12 O 6 →2C 2 H 5 OH+2CO 2 +能量
七、板书设计
八、教学反思
酶 酶
[ [ 资料] ] ------ 葡萄酒的类别 葡萄酒若以颜色区分,可分为白酒、红酒和玫瑰红酒,但无论是红葡萄或白葡萄所压榨出来的果汁都是没有颜色的,所以白酒可以用红葡萄酿造,红酒是由于在酿造时连葡萄的皮一起发酵,吸收红葡萄皮所释放出来的色素而成为有颜色的红葡萄酒,如将红葡萄皮提早分开,让酒的颜色变淡,即成为玫瑰红酒。每家酒厂的玫瑰红酒由于葡萄皮与酒接触的时间长短不一,故颜色的深浅也不一致。白葡萄皮因没有色素效果,故酿造时并没有连皮一起发酵。
葡萄在成熟后便含有果糖、果酸,所谓酿造葡萄酒,简单来说,只是把葡萄压榨后的果汁,在发酵过程中将果糖转换成酒精,如果果糖全部转成酒精,则我们称这些为不甜或乾(dry)的酒,如在转换个程中,提前终止发酵,保留多一点糖份,便变成甜酒。
葡萄在发酵过程时,并同时产生热能和二氧化碳(汽泡),通常一般葡萄酒会让汽泡跑掉,但如把汽泡保存于葡萄酒中,便成为汽泡葡萄酒(Sparkling wine),香槟便是名闻世界之代表作(只有在法国香槟产区依规定酿制之汽泡酒,才能命名香槟,法国其它地区或世界各地之酿制,只能称作汽泡酒)。
课题2 腐乳的制作 【教学三维目标】
(一)知识与技能:说明腐乳制作的原理 (二)过程与方法:注意实验流程的操作环节;动手实践,体验其中的变化 (三)情感、态度与价值观
以制作腐乳为例,了解古代劳动人民对发酵技术的应用;养成细心严谨的科学态度 【教学重点】
说明腐乳制作过程的科学原理,设计并完成腐乳的制作 【教学难点】
在实践中摸索影响腐乳品质的条件 【教学方法】
启发式教学 【教学工具】
多媒体课件 【教学过程 】
(一)引入新课 在人们的餐桌上的饭菜不但与“香”相联系,而且与“臭”也有牵连:臭豆腐、臭鸡蛋、臭虾酱等等。这些嗅起来“臭”而吃起来“香”的食品也与发酵有着密切关系。
(二)进行新课(阅读“腐乳制作原理”,完成基础知识)
1 1 .基础知识 1.1腐乳的制作原理 腐乳制作过程中发挥作用的微生物主要是 毛霉 ,其属于 真菌,其同化作用类型是 异养型。
毛霉等微生物产生的 蛋白质 酶等能将豆腐中蛋白质分解成小分子的 多肽 和 氨基酸 ;产生的 脂肪 酶能将豆腐中脂肪水解为 甘油 和 脂肪酸 。
〖思考1〗写出蛋白质和脂肪的水解的反应式:
〖思考 2〗在日常生活中,人们通常将鱼和肉腌制起来长时间保存,其原因是 在高浓度盐水溶液中细菌脱水死亡 。
2 2 .实验设计
阅读“实验设计”及有关资料,完成以下问题:
〖思考3〗什么样的豆腐适合于做腐乳?为什么? 含水量适中(70%左右)。含水量过高腐乳不易成型。
2.1毛霉的生长:毛霉生长的适宜条件:温度 15~18℃ ,保持一定的 湿度 。
〖思考4〗自然条件下毛霉来自空气中的 毛霉孢子 ;在工厂化生产中毛霉来自 严格无菌 条件下的 直接接种优良菌种 。
〖思考5〗腐乳表面的“皮”主要是由 毛霉的菌丝 构成的。
2.2 加盐腌制:在长满毛霉的豆腐块上加盐的目的是 析出豆腐中的水分使之变硬和抑制微生物的生长避免腐败变质 。
〖思考6〗瓶口处多加盐的原因是 瓶口处容易被杂菌污染 。
〖思考7〗加盐为什么能防止食品腐败? 高浓度盐溶液能有效抑制微生物的生长。
(3)配制卤汤:卤汤的作用是调节腐乳的 色、香、味 ,并可以抑制 微生物的生长 。
〖思考8〗卤汤中的哪些成分具有防腐杀菌作用? 酒精和香辛料。
3 3 .发酵操作 阅读“操作提示”,完成相关问题。
3.1控制好材料的用量 一是控制好 盐 的用量:过多影响口味,过少容易 腐败变质 。
二是控制卤汤中 酒精 含量在 12%左右:过高会延长腐乳的 成熟 ,过低可能导致 豆腐变质 。
2.防止杂菌感染 防止杂菌感染的措施有:玻璃瓶用 沸水 消毒;装瓶过程中操作要 迅速小心 ;装瓶后用胶带密封;密封后用 酒精灯 消灭瓶口杂菌。
〖思考9〗在整个制作过程中,还有哪些防止杂菌感染的措施? 加盐腌制、卤汤中的酒精和香辛料等。
〖思考10〗制作腐乳的配方有 红 方、 槽 方和 青 方等。红色腐乳是由于制作中利用了 红曲 而使腐乳呈现红色。
【补充】腐乳发酵:
前期发酵:一是毛霉生长,分泌以蛋白质酶为主的各种酶,使蛋白质水解成氨基酸;二是毛霉形成菌膜包住豆腐使之成形。
后期发酵:酶与微生物协同参与生化反应。
腌制处理:各种辅料及酶的缓慢作用,使腐乳生成香气。
4 4 .结果分析与评价 4.1用盐量对腐乳制作有哪些影响? 调节口味、杀菌、脱水等。
4.2发酵温度对腐乳制作有什么影响? 温度过低或过高会影响毛霉的生长和酶的作用,从而影响发酵的进程和发酵质量。
4.3发酵时间对腐乳制作有什么影响? 时间过短,发酵不充分;时间过程,豆腐会软化不易成型,从而影响腐乳的口味。
(三)课堂总结、点评
(四)实例探究 例1 1. .以下四种微生物都参与的豆腐的发酵,从代谢类型上考虑哪一项与其它三项有明显区别(
)
A.青霉
B.酵母
C.曲霉
D.毛霉 解析:四种生物全为真核生物,同化作用类型都为异养型,不同的是酵母菌的异化作用类型是兼性厌氧型,而其它三项全为需氧型。答案:B
例2 2 .葡萄糖在毛霉细胞质内分解至丙酮酸的过程中,下列叙述正确的是(
)
A.在线粒体中进行的无氧呼吸
B.需在有氧条件下进行 C.不产生CO 2
D.反应速度不受温度影响 解析:葡萄糖在细胞质基质中分解成两分子丙酮酸和少量[H]及少量的能量,这一阶段也是无氧呼吸的第一阶段,因此不需氧的参与。
答案:C
☆综合应用 例3 3.腐乳味道鲜,易于消化、吸收,是因为其内主要含有的营养成分是 A.无机盐、水、维生素
B.氯化钠、氨基酸、甘油和脂肪酸 C.多肽、氨基酸、甘油和脂肪酸
D.蛋白质、脂肪、氯化钠、水 解析:豆腐的主要营养成分是蛋白质和脂肪。在毛霉等多种微生物分泌的蛋白酶和脂肪酶的作用下分解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等营养成分
答案:C 【板书设计】
【教学反思】
腐乳的制作 制作原理 毛霉等分泌水解酶 蛋白酶 脂肪酶 蛋白质分解成多肽和氨基酸 脂肪分解成甘油和脂肪酸 实验设计 实验流程 让豆腐上 长出毛霉加盐 腌制 加卤汤 装瓶 密封 腌制 毛霉生长 腌制方法 配制与作用 实验操作 控制材料的用量 盐和酒精用量不能过高或过低 防止杂菌的感染 沸水、密封、加盐、酒精、香辛料 结果分析评价 影响腐乳风味和质量的因素
课题3 制作泡菜并检验亚硝酸盐含量 【教学三维目标】
(一)知识与技能 泡菜制作过程中乳酸菌发酵的原理;泡菜中亚硝酸盐含量变化及测定 (二)过程与方法 乳酸菌发酵与细胞呼吸的联系;测定亚硝酸盐时的化学操作 (三)情感、态度与价值观
认同劳动人民在时间中利用微生物进行泡菜制作的技能;对泡菜中亚硝酸盐含量的测定,引导学生关注食品安全,维护身体健康 【教学重点】制作泡菜并测定泡菜中亚硝酸盐含量 【教学难点】泡菜中亚硝酸盐含量的测定 【教学方法】启发式教学 【教学工具】多媒体课件 【教学过程】
(一)引入新课 泡菜不但味美,而且还可以提高人的食欲。泡菜是怎样制作的?泡菜中含有亚硝酸盐,亚硝酸盐有什么危害?怎样测定泡菜中亚硝酸盐含量? (二)进行新课 阅读“乳酸菌发酵”,完成基础知识学习 1 1 .基础知识 1.1 制作泡菜所用微生物是 乳酸菌 ,其代谢类型是 异养厌氧 型。在 无氧 条件下,降糖分解为 乳酸 。反应式为:
1.2 常见的乳酸菌有 乳酸链球菌 和 乳酸杆菌 ,生产酸奶的是 乳酸杆菌 。
〖思考1〗含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是 抗生素杀死乳酸菌 。
活动2:阅读“亚硝酸盐”,回答下列问题:
1.3 亚硝酸盐在食品生产中常用作 食品添加 剂。
1.4 国家规定肉制品中不超过30mg/kg,酱腌菜中不超过20mg/kg,婴儿奶粉中不超过2mg/kg。
1.5亚硝酸盐被吸收后随 尿液 排出体外,但在 适宜pH 、 温度 和 一定微生物 作用下形成致癌物质 亚硝胺 。
〖思考2〗日常生活中不宜食用放置时间过长和变质蔬菜的原因是什么? 亚硝酸盐含量较高。
2 2 .实验设计 2.1实验流程:填写流程图。
〖思考3〗在哪些操作过程中会感染乳酸菌? 修整、洗涤 晾晒、切分 原料加工 条状或片状 加盐
泡菜盐水 加入_______ 并装坛
原料加工和装瓶。
2.2泡菜的制作 ①将新鲜蔬菜预先处理成条状或片状。
②泡菜盐水按清水和盐为 4∶1 质量比配制煮沸冷却备用。
③预处理的新鲜蔬菜装至半坛时放入 蒜瓣、生姜、香辛料 等佐料,并继续装至八成满。
④倒入配制好的盐水,使盐水 浸没全部菜料 。
⑤盖上泡菜坛盖子,并用 水 密封发酵。发酵时间受到 温度 影响。
〖思考4〗泡菜坛内的“白膜”是怎样形成的?
产膜酵母繁殖。
2.3 测定亚硝酸盐含量的原理 在 盐酸酸化 条件下,亚硝酸盐与 对氨基苯磺酸 发生 重氮化 反应后,与 N-1-萘基乙二胺盐酸 盐结合形成 玫瑰红 色染料,与已知浓度的 标准显色液 目测比较,估算泡菜中亚硝酸盐含量。
3 3 .发酵操作 3.1 泡菜坛的选择标准是 火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好 ,否则容易引起蔬菜腐烂 。
3.2 腌制时要控制腌制的 时间 、 温度 和 食盐 的用量。
〖思考5〗导致细菌大量繁殖,亚硝酸盐含量增加的因素有食 盐用量不足10% 和 腌制时间过长 。一般在腌制 10 天后亚硝酸盐含量开始降低。
4 4 .结果分析与评价 4.1 测定亚硝酸盐的含量 (1)需要配制的溶液有:
对氨基苯磺酸溶液、N-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液、亚硝酸钠溶液、提取剂、氢氧化铝乳液和氢氧化钠溶液。
〖思考6〗哪些溶液需要避光保存?提取剂的成分有哪些? 对氨基苯磺酸溶液、N-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液;氯化镉和氯化钡。
(2)配制标准显色液的基本步骤是:
①用 刻度移液管 吸取体积0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5mL的 亚硝酸钠 溶液分别置于比色管中,另取1支比色管为空白对照。
②向各管加入2.0mL 对氨基苯磺酸溶液 混匀静置3~5分钟。
③向各管加入1.0mL N-1-萘基乙二胺盐酸盐 溶液。
④最后用 蒸馏水 定容到50mL。
活动9:阅读“制备样品处理液”,讨论并回答下列问题:
(3)制备样品处理液的步骤是:
①称取 0.4 kg泡菜,粉碎榨汁,过滤得约200mL汁液。
②取100mL汁液倒入500mL容量瓶,添加200mL 蒸馏水 和100mL 提取剂 ,摇床振荡1h,再加40mL 氢氧化钠溶液 ,最后用 蒸馏水 定容到500mL并立刻 过滤 获得滤液。
③将滤液60mL移入100mL容量瓶,用 氢氧化铝乳液 定容后过滤,获得 无色透明 的滤液。
活动10:阅读“比色”,讨论并回答下列问题:
(4)比色的步骤是:
①将40mL滤液移入50mL比色管中,并编号。
②分别依次加入 2.0mL 的 对氨基苯磺酸溶液 和 1.0mL 的 N-1-萘基乙二胺盐酸溶液 ,并定
容到50mL,混匀静置15min。
③观察颜色变化,并与 标准显色液 比较,记录亚硝酸盐含量。
④计算样品滤液(40mL)中亚硝酸盐含量。计算公式是:
〖思考 7〗经测定某样品滤液中亚硝酸盐含量为 5.0µg,40mL 滤液的质量为 41.3g,则泡菜中亚硝酸盐含量为 0.12mg/kg 。
4.2制作的泡菜一般在 10 天之后食用最好,原因是 亚硝酸盐含量明显降低 。
〖思考8〗在酸奶制作过程 会 (不会、会)产生亚硝酸盐。
(三)课堂总结、点评
(四)实例探究 例1 1 .以下不属于发酵的是 A、利用需氧型青霉菌生产青霉素
B、缺氧时人的组织细胞产生乳酸 C、利用酵母菌的无氧呼吸获得酒精
D、利用乳酸菌制作泡菜 解析:解答该题首先要理解发酵的概念,发酵是指在生产实际中,人们通过微生物的培养,大量生产各种代谢产物的过程。这里有 3 个要点,一是用于生产,二是培养微生物,三是生产代谢产物。根据概念可知,生产代谢产物青霉素有一个培养青霉菌的过程;生产酒精有一个培养酵母菌的过程;制作泡菜实质是培养乳酸菌,使其利用菜中的营养物质生产代谢产物乳酸的过程。因此,A、C、D都符合发酵的概念。而B项中虽有代谢产物乳酸,但不是微生物所为,也不存在培养微生物的过程,更不是用于生产,因此不属于发酵。
答案:B 例2 2 .将等量萌发的种子和煮沸自然冷却后的种子分别放入甲、乙两个试管中,如下图所示本实验中石蜡油短期内不影响生物的生长)。两试管中均无空气存在。据图分析回答:
(1)甲试管放置几个小时后,管内顶部出现气泡,其中的气体成分主要是________;将该气体引入________溶液中,可使该溶液变混浊。
(2)甲试管中产生气泡的现象是种子进行________________造成的,写出表示这一过程的反泡菜的制作 原理 在无氧条件下,乳酸菌将糖分解为乳酸(反应式)。
设计 原料选择、预处理 调味装坛 发酵 成品 操作 泡菜坛的选择 腌制时间、温度和食盐量的控制 亚硝酸盐含量测定 原理 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应后,在与 N-1-萘基乙二胺盐酸生成玫瑰色染料,并与标准液比较确定亚硝酸盐含量。
步骤 配制溶液 配制标准液 配制样品液 比色计算 结果分析与评价 亚硝酸盐的形成、含量变化及其危害
应式________________________________。
(3)乙试管在与甲试管同样的时间内,试管内顶部未出现气泡,原因是
________________________________。
(4)乙试管继续放置几天,一些微生物开始繁殖,导致试管内顶部也出现少量气体,这是这些微生物从试管中的________获得了所需要的营养物质进行新陈代谢的结果。一般来说,微生物所需要的营养要素可归纳成_______、_______、______、_________和_______五大类。
(5)这些微生物可能的来源是(答出两个来源即可。)________________________
解析:根据题意,试管中无空气,所以甲试管顶部的气体是种子进行无氧呼吸产生的CO 2 ,CO 2能使 Ca(OH)
2 溶液变混浊。被煮沸过的种子已死亡,新陈代谢已停止,不能进行呼吸作用。微生物需要的营养物质包括碳源、氮源、生长因子、无机盐和水,死亡的种子可以为微生物的生长提供所需要的营养物质。乙试管中微生物可能的来源有:未灭菌的试管内壁的菌类、操作过程中带入的菌类、石蜡油中的菌类、铁丝网上的菌类、种子表面耐高温的没有被杀死的菌类等。
答案:(1)CO 2
、Ca(OH) 2 (2)无氧呼吸
C 6 H 12 O 6 -酶-→2C 2 H 5 OH(酒精) + 2 CO 2 + 能量 (3)被煮沸过的种子已经死亡,不能进行呼吸作用(4)死亡种子中、碳源、 氮源、生长因子、无机盐、水(5)未灭菌的试管内壁的菌类、操作过程中带入的菌类、石蜡油中菌类、铁丝网上的菌类、种子表面耐高温的没有被杀死的菌类。
☆综合应用 例3 3.腐乳味道鲜,易于消化、吸收,是因为其内主要含有的营养成分是 A.无机盐、水、维生素
B.氯化钠、氨基酸、甘油和脂肪酸 C.多肽、氨基酸、甘油和脂肪酸
D.蛋白质、脂肪、氯化钠、水 解析:豆腐的主要营养成分是蛋白质和脂肪。在毛霉等多种微生物分泌的蛋白酶和脂肪酶的作用下分解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等营养成分
答案:C 【板书设计】
【教学反思】
专题二
微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养
【教学三维目标】
(一)知识与技能 了解有关培养基的基础知识;掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术 (二)过程与方法
分析实验思路的确定和形成的原因,分析实验流程,对比前面的实验设计,归纳共性,分析差异,增加印象 (三)情感、态度与价值观:
形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 【教学重难点】无菌技术的操作 【教学方法】启发式教学 【教学工具】多媒体课件 【教学过程】
(一)引入新课 在传统发酵技术的应用中,都利用了微生物的发酵作用,其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中,为了提高发酵的质量,需要获得优良菌种,并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。
(二)进行新课 1 1 .基础知识 1.1 培养基的种类包括 固体 培养基和 液体 培养基等。
〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的 多糖 ,在配制培养基中用作为 凝固剂 。
【补充】培养基的类型及其应用:
1.2 培养基的化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 四类营养成分。
〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看,培养基中为什么都含有这些营养成分? C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素,约占原生质总量的97%以上。
【补充】碳源:如 CO2、糖类、脂肪酸等有机物,构成微生物的结构物质和分泌物,并提供能量。
氮源:如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等,主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源,又可以作为氮源,如氨基酸等。
1.3 培养基除满足微生物生长的 pH 、 特殊营养物质 和 氧气 等要求。
【补充】生长因子:某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子,如某些氨基酸、碱基、维生素等。
〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供 糖 、 维生素 和 有机氮 等营养物质。
〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ,培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ,标准 培养基类型 配制特点 主要应用 物理性质 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离,鉴定,计数 半固体培养基 加入琼脂较少 菌种保存 液体培养基 不加入琼脂 工业生产,连续培养 化学组成 合成培养基 由已知成分配制而成,培养基成分明确 菌种分类、鉴定 天然培养基 由天然成分配制而成,培养基成分不明确 工业生,产降低成本 目的用途 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别 选择培养基 添加(或缺少)某种化学成分 菌种的分离
培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。
活动2:阅读“无菌技术”,讨论回答下列问题:
1.4 获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 。
1.5 无菌技术包括:
(1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ; (2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ; (3)为避免周围微生物污染,实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行; (4)避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。
1.6 比较消毒和灭菌(填表)
〖思考5〗无菌 技术除了防止培养物被污染外,还具有的目的是 防止感染实验操作者 。
1.7 消毒方法:
(1)日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法; (2)对一些不耐高温的液体,则使用 巴氏 消毒法(作简要介绍); (3)对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果,然后使用 紫外线 进行物理消毒。
(4)实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒; (5)饮水水源用 氯气 进行消毒。
1.8灭菌方法:
(1)接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法; (2)玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法,所用器械是 干热灭菌箱 ; (3)培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法,所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。
(4)表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法,所用器械是 紫外灯 。
〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。
〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤,目的是避免妨碍热空气流通。
〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要首先打开排气阀,煮沸并排除锅内冷空气,其目的是 有利于锅内温度升高 ;随后关闭排气阀继续加热,气压升至 100k Pa,温度为 121℃ ,并维持 15~30 min;最后切断热源,使温度自然降温,气压务必降至 零 时打开锅盖,其目的是防止 容器中的液体暴沸
。
【补充】培养基的配制原则:
①目的要明确:根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。
②营养要协调:培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如:碳氮比4∶1时,谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少;碳氮比为3∶1时,菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。
③pH要适宜:细菌培养基pH中性或偏碱性,霉菌培养基呈酸性。
2 2 .实验操作 2.1 计算:根据配方比例,计算100mL培养基各成分用量。
比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 能
2.2 称量:准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速,目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。
2.3 溶化:①加水加热熔化牛肉膏;②加入蛋白胨和氯化钠继续加热;③加入琼脂;④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
2.4 调pH:用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。
2.5 灭菌:将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。
2.6 倒平板:待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是:
①在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞; ②右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰; ③左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖。
④待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。
〖思考1〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌,防止杂菌感染培养基。
〖思考2〗倒平板的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
〖思考3〗若皿盖和皿底之间粘有培养基,则该平板能否培养微生物?为什么? 不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖,并污染皿内培养基。
〖思考4〗配制斜面培养基中,试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染。
〖思考5〗试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。
2.7 接种 2.7.1微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法,另外还有穿刺接种和斜面接种等。
2.7.2平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是:
①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环,并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。
③将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。
④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。
⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙,把接种环伸入平板内划3~5条平行线,盖上皿盖,不要划破培养基。
⑦灼烧接种环,冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程,完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。
⑧将平板倒置放在培养箱中培养。
〖思考6〗取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物;除第一次划线外,其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种;取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行,其目的是防止高温杀死菌种;最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
〖思考7〗在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。
2.7.3 稀释涂布平板法:将菌液进行一系列梯度稀释,并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的标准菌落。
2.7.4 系列稀释操作:
①取盛有9mL水的无菌试管6支,编号101、102、103、104、105、106。
②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中,并吹打3次,使之混匀。
③从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀,获得102倍液。依此类推。
〖思考8〗操作中试管口和移液管应在离火焰1~2cm处。整个操作过程中使用了1支移液管。
3.1 培养未接种培养基的作用是对照,若有菌落形成,说明培养基灭菌不彻底。
3.2 在肉汤培养基上,大肠杆菌菌落呈白色,为圆形,光滑有光泽,边缘整齐。
3.3 培养12h和24h后的菌落大小不同(相同、不同);菌落分布位置相同(相同、不同)。原因是时间越长,菌落中细菌繁殖越多,菌落体积越大;菌落的位置不动,但菌落数增多。
〖思考9〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落,原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。
〖思考 10〗频繁使用的菌种利用临时保藏法保存,长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后,保存在 4℃冰箱中,每 3~6 个月转种培养一次,缺点是保存时间较短,容易发生污染和变异;后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在-20℃冷冻箱中。
(三)实例探究 例1 1.关微生物营养物质的叙述中,正确的是 A.是碳源的物质不可能同时是氮源
B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐
D.无机氮源也能提供能量 解析:不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项,它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源,如二氧化碳;有的碳源可同时是氮源,如NH 4 HCO 3 ;有的碳源同时是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于C 选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可作为自养型微生物的碳源;NaHC O 3 ,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项,无机氮源提供能量的情况还是存在的,如NH 3 可为硝化细菌提供能量和氮源。
答案:D 例2 2 .下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染
B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌
D.灭菌必须在接种前 解析:灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A 说的是灭菌的目的,因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种,整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌),所以是正确的;B 是错误的,因为灭菌的目的是防止杂菌污染,但实际操作中不可能只消灭杂菌,而是消灭全部微生物。C 是正确的,因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌;发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的,灭菌必须在接种前,如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。
答案:B (四)课堂总结、点评
☆综合应用 例3 3 .右表是某微生物培养基成分,请据此回答:
编 成分 含量 微生物的实验室培养 培养基 无菌技术 纯化大肠杆菌 培养基的配制 配制培养基的原则 配制培养基的方法 计算→称量→溶化→调pH→分装→加棉塞→灭菌→倒平板 平板划线法 稀释涂布法 系列稀释 平板涂布
(1)右表培养基可培养的微生物类型是
。
(2)若不慎将过量NaCl 加入培养基中。如不想浪费此培养 基 , 可 再 加 入
, 用 于 培养
。
(3)若除去成分②,加入(CH 2 O),该培养基可用于培养
。
(4)表中营养成分共有
类。
(5)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是
。
(6)右表中各成分重量确定的原则是
。
(7)若右表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分是
。
解析:对于一个培养基,它能培养何种微生物,要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基,如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物质的类型出发。右表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类,缺乏碳源和特殊营养物质。对特殊营养物质,有的微生物是不需要的,但没有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源,说明培养的微生物是从空气中获得碳源的,即可培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中加入了过量食盐,就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培养基,但金黄色葡萄球菌是异养型微生物,这个培养基就还需要加入有机碳源。该培养基若加入(CH 2 O),培养基中就有了碳源,但除去成分②,却使培养基中没有了氮源,这时就只能用于培养固氮微生物了。对于菌种鉴定,往往用的是固体培养基,而表中没有凝固剂,需要加入常见的凝固剂——琼脂。
答案:⑴自养型微生物
⑵含碳有机物
金黄色葡萄球菌
⑶固氮微生物
⑷3
⑸调整pH
⑹依微生物的生长需要确定
⑺琼脂(或凝固剂)
【板书设计】
【教学反思】
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【教学三维目标】
(一)知识与技能 利用选择培养基分离细菌,运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数 (二)过程与方法
分析研究思路的形成过程,找出共性和差异性 (三)情感、态度与价值观
形成无菌不在的概念,养成讲究卫生的习惯 【教学重点】对土样的选取和选择培养基的配制 【教学难点】对分解尿素的细菌的计数 【教学方法】启发式教学 【教学工具】多媒体课件 号 ① 粉状硫 10g ② (NH 4 )2 SO 4
0.4g ③ K 2 HPO 4
4.0g ④ MgSO 4 4
9.25g ⑤ FeSO 4
0.5g ⑥ CaCl 2
0.5g ⑦ H 2 O 100ml
【教学过程】
(一)引入新课 上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。下面我们来学习如何进行细菌的分离,获得所需要的目的微生物。
(二)进行新课 1 1 .基础知识 1.1 尿素是一种重要的氮肥,农作物不能(能,不能)直接吸收利用,而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为 氨和CO 2
,这是因为细菌能合成 脲酶 。
1.2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为 热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物 ,这样也适用于实验室中微生物的筛选,原理是 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、PH等),同时抑制或阻止其他微生物生长 。
点评:生物适应一定环境,环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖思考 1〗在该培养基配方中,为微生物的生长提供碳源的是 葡萄糖 ,提供氮源的的是 尿素 ,琼脂的作用是 凝固剂 。
〖思考2〗该培养基对微生物 具有 (具有,不具有)选择作用。如果具有,其选择机制是 只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长 。
1.3在统计菌落数目时,常用来统计样品中活菌数目的方法是 稀释涂布平板法 。除此之外, 显微镜直接计数 也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式:观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数=红细胞含量∶细菌含量 1.4 采用稀释涂布平板法统计菌落数目时,培养基表面生长的一个菌落,来源于 样品稀释液中一个活菌 。通过统计 平板上的菌落数 ,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在 30~300 的平板进行计数。
〖思考 3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是 (平均菌落数÷涂布的稀释液体积)×稀释倍数 。
〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是 恰当的稀释度 。
〖思考5〗第 二 位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需设置重复实验组;第二位同学统计的三个菌落数相差太大,说明操作有误,需重新实验。
1.5 统计的菌落数比活菌的实际数目 低 。这是因为当两个或多个细胞在一起时,平板上观察到的只是 一个 菌落。因此,统计结果一般用 菌落数 来表示。
1.6 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。
1.7对照实验是指除了 被测试 的条件外,其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组,未满足该条件的称为 实验 组。
〖思考6〗请设计本实验的对照实验组:
方案1:其他同学用A同学的土样进行实验。方案2:A同学以不接种的培养基作为空白对照。
2 2 .实验设计 2.1 实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。
2.2 根据图示2-7填写以下实验流程:
菌落计数 配制土壤溶液 系列稀释 涂布平板与培养
2.3 土壤微生物主要分布在距地表3~8cm的近中性土壤中,约70%~80%为细菌。
2.4 分离不同的微生物采用不同的稀释度,其原因是不同微生物在土壤中含量不同,其目的是保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为10 4 、10 5 、10 6 ,放线菌稀释度为10 3 、10 4 、10 5 ,真菌稀释度为10 2 、10 3 、10 4 。
2.5 培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在 30~37℃培养 1~2d,放线菌一般在25~28℃培养5~7d,霉菌一般在25~28℃的温度下培养3~4d。
2.6 在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
点评:菌种中有些菌体增殖快,有些菌体增值慢,所以培养时间要充足,使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。
2.7菌落的特征包括 形状、大小、隆起程度、颜色 等方面。
〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么?土壤中营养物质含量丰富,环境条件适宜等。
2.8 实验过程 1)取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
2)应在火焰旁称取土壤 10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,塞好棉塞。
3)在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁进行。
4)实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
5)为了提高效率,在操作时更加有条不紊,应当事先规划时间。
〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作,以防被致病微生物感染,实验后一定要洗手。
3 3 .结果分析与评价 3.1 对分离的菌种作进一步的鉴定,还需要借助 生物化学 的方法。
3.2 在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的 脲酶 将尿素分解成了 氨 。氨会使培养基的碱性 增强 ,PH 升高 。因此,我们可以通过检测培养基 pH 变化来判断该化学反应是否发生。
3.3 在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂。培养某种细菌后,如果PH升高,指示剂将变 红 ,说明该细菌能够 分解尿素 。
〖思考 10〗测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后,将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养,大肠杆菌菌落呈现 黑 色,通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取 三 个水样。
(三)课堂总结、点评
(四)实例探究 例1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是 A.在液体培养基上进行
B.至少接种一种细菌
C.接种一个细菌
D.及时补充消耗的营养物质 解析:细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的。这些条件是:一种细菌、恒定实验方案 土壤中尿素分解菌的分离与计数 分离筛选微生物的原理 有利于目的菌株生长 抑制或阻止其他微生物生长 人为 条件 微生物计数方法与原理 稀释涂布平板法 显微镜直接计数 对照设置与重复设置 实验设计 实验操作 结果与分析
容积的培养基,液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下,才能测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长;恒定容积是给微生物提供一定的生存环境;液体培养基才能通过样品推测细菌总数。若接种多种细菌,则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时,要保证一定的接种量。
答案:A 例2.在微生物群体生长规律的测定中,种内斗争最显著最激烈的时期是 A.调整期
B.对数期
C.稳定期
D.衰亡期 解析:种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕,营养充足的时候,种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加,每个个体的生存空间越来越少,营养物质也越来越少,每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈,种内斗争就越来越激烈。由此可知,在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期,微生物的数目已经开始减少,pH已经极度不适于微生物的生存,次级代谢产物积累到很高的程度,这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。
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