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摘要:用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的方法对大仓鼠(Cricetulus triton)消化系统中的SOD、EST和AMY 3种酶的酶谱进行分析。结果表明,大仓鼠消化系统中共分离出SOD1~SOD11、电泳迁移率0.909~0.023的11条谱带;共分离出EST1~EST12、电泳迁移率0.742~0.188的12条谱带;共分离出AMY1~AMY8、电泳迁移率0.564~0.154的8条谱带。大仓鼠消化系统中SOD、EST和AMY 3种酶均有表达,组织内和组织间谱带的表达强度和活性均有差异,并存在明显的组织特异性。
关键词:大仓鼠(Cricetulus triton);SOD;EST;AMY;电泳;谱带
中图分类号:S443.3;Q55 文献标识码:A
文章编号:0439-8114(2019)22-0152-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.22.036 开放科学(资源服务)标识码(OSID):
Study on distribution of enzymes in the digestive system of Cricetulus triton
XU Chun-yu1,JIN Jian-li1,YU Cheng-wen1,ZHANG Jun-sheng1,XING Yan2,JIN Zhi-min1
(1.Mudanjiang Normal College,Mudanjiang 157011,Heilongjiang,China;2.Mudanjiang No.2 Middle School,Mudanjiang 157012,Heilongjiang,China)
Abstract: To provide basic research data for big hamster(Cricetulus triton) experimental animal research and pest control. The enzyme profiles of SOD, EST and AMY in digestive system of hamster were analyzed by means of polyacrylamide gel vertical plate electrophoresis. Results showed that eleven bands of SOD1~SOD11 and electrophoretic mobility of 0.909~0.023 were isolated from the digestive system of hamsters;twelve bands of EST1~EST12 and electrophoretic mobility of 0.742~0.188 were isolated.eight spectral bands of EST1~EST11 and electrophoretic mobility of 0.564~0.154 were isolated. The three enzymes SOD, EST and AMY were expressed in the digestive system of hamster, and the expression intensity and activity of tissue and intertissue bands were different, with obvious tissue specificity.
Key words: big hamster(Cricetulus triton); SOD; EST; AMY; electrophoresis; band
大仓鼠(Cricetulus triton),属仓鼠科仓鼠属,是中国华北平原旱作区农田主要害鼠之一[1]。研究消化酶的分布是探究动物摄食、消化吸收营养物质的基础,其活性强弱决定机体对营养物质消化的能力,从而影响机体的发育[2-5]。关于大仓鼠已有较多研究报道[6,7],但是对于大仓鼠消化系统中酶的分布研究未见报道。本研究采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法,对大仓鼠胃、小肠、大肠和肝脏4种组织中SOD、EST和AMY 3种酶的活性及分布进行研究,为大仓鼠实验动物化研究及害鼠防治提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
大仓鼠:2018年10月中旬至11月初捕于牡丹江三道关林场。
1.2 方法
1.2.1 样品制备 将大仓鼠胃、大肠、小肠、肝脏4种组织与磷酸缓冲液(m∶V=1∶10)进行混合研磨制成匀浆,然后在4 ℃、8 000 r/min的条件下离心20 min,留上清液4 ℃保存,待测。
1.2.2 电泳方法 采用常规聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法将大仓鼠胃、大肠、小肠、肝脏4种组织中SOD、EST、AMY进行分离分析。
1.2.3 染色方法 SOD、EST、AMY 3种酶的染色参照文献[8]。
2 结果与分析
2.1 SOD电泳结果分析
大仓鼠4种组织SOD电泳谱带分布及电泳迁移率见表1、图1。由表1、图1可知,大仓鼠胃、小肠、大肠、肝脏4种组织共分离出SOD1~SOD11。胃分离出SOD2、SOD5~SOD7,迁移率分别为0.884、0.379~0.265的4条譜带;小肠分离出SOD2、SOD5~SOD8、SOD10~SOD11,迁移率分别为0.884、0.379~0.091、0.030~0.023的7条谱带;大肠分离出SOD1、SOD5~SOD8、SOD10~SOD11,迁移率分别为0.909、0.379~0.091、0.030~0.023的7条谱带;肝脏分离出SOD2~SOD9,迁移率分别为0.884~0.038的8条谱带。
大仓鼠4种组织之间SOD酶活性表达强度为肝脏>大肠>小肠>胃,其中SOD5~SOD7为共有谱带,迁移率0.379~0.265,肝脏表达活性最强。SOD1为大肠的特有谱带,迁移率0.909;SOD9为肝脏的特有谱带,迁移率0.038。
2.2 EST电泳结果分析
大仓鼠4种组织EST酶电泳谱带分布及电泳迁移率见图2、表2。由图2、表2可知,大仓鼠胃、小肠、大肠、肝脏4种组织共分离出EST1~EST12。胃分离出EST2~EST5、EST7、EST9~EST12,迁移率分别为0.714~0.679、0.382、0.259~0.188的9条谱带;小肠分离出EST1~EST5、EST7、EST9~EST12,迁移率分别为0.742~0.679、0.382、0.259~0.188的10条谱带;大肠分离出EST2~EST5、EST9~EST12,电泳迁移率分别为0.714~0.679、0.259~0.188的8条谱带;肝脏分离出EST3~EST6、EST8~EST12,电泳迁移率分别为0.696~0.661、0.321~0.188的9条谱带。
大仓鼠4种组织之间SET酶活性表达强度为小肠>肝脏>大肠>胃,其中EST9~EST12和EST3~EST5为共有谱带,迁移率0.259~0.188和0.696~0.679,且小肠表达活性最强。EST1为小肠特有谱带,迁移率0.742;EST6和EST8为肝脏特有谱带,迁移率0.661、0.321。
2.3 AMY电泳结果分析
大仓鼠的4种组织AMY酶电泳谱带分布及电泳迁移率见图3、表3。由图3、表3可知,大仓鼠胃、小肠、大肠、肝脏4种组织共分离出AMY1~AMY8。胃分离出AMY1~AMY8,电泳迁移率为0.565~0.154的9条谱带;小肠分离出AMY5~AMY8,电泳迁移率为0.231~0.154的4条谱带;大肠分离出AMY5~AMY8,电泳迁移率为0.231~0.154的4条谱带;肝脏分离出AMY5~AMY6,电泳迁移率为0.231~0.205的2条谱带。
大仓鼠4种组织之间AMY酶活性表达强度为大肠>小肠>胃>肝脏,其中AMY5~AMY6为共有谱带,迁移率0.231~0.205,大肠活性表达最强。AMY1~AMY4为胃的特有谱带,迁移率0.564~0.496。
3 小结与讨论
SOD是生物机体抗氧化防御的酶,能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应,能清除体内产生的自由基。这因为肝脏不但是机体消化腺,能够分泌参与食物消化的酶,还是生物体内最大的解毒组织,保护机体免受超氧阴离子自由基的损伤。大仓鼠4种组织均有SOD分布,肝脏SOD的谱带分布广且SOD活性最强,这与肝脏功能相关。
EST参与生命活动的基础代谢,存在于各种组织中。小肠是机体消化食物和营养吸收的主要场所,大量的酯类化合物在小肠进行水解反应,这需要大量的EST酶进行催化,肝脏在糖类、脂类、蛋白质等物质代谢中起着重要作用。大仓鼠小肠中EST酶的谱带表现出较强的活性,这与小肠的功能相适应。肝脏中EST酶的谱带表达活性较强,而且分离出来的谱带数多于胃和大肠,这与肝脏功能有关。
AMY是以淀粉或糖原为底物。食物进入体内先经过胃的初步分解成可溶性淀粉,再到小肠进行主要的消化和分解。大仓鼠胃分离出的AMY谱带最多,这与胃作为机体消化过程中的重要场所物质代谢旺盛相符。肝脏参与淀粉的消化过程,经肠道消化吸收的單糖到达肝脏转化为肝糖原贮存,本研究小肠和大肠中AMY活性高于肝脏中AMY活性,这与周健恺等[9]关于银鲳不同消化器官中消化酶活性的研究结果不同,但与于洋[10]关于平贝母不同阶段培养体淀粉酶研究结果相同,有待于进一步研究。
SOD、EST、AMY在大仓鼠体内均有表达,4种组织表达强弱不同,但在小肠中均有较强的表达。在4种组织中存在谱带缺失的现象,这些差异是由有关基因表达和调控的差异造成的,酶活性存在的差异与组织的功能相关,显示出4种组织功能及代谢活跃程度。
参考文献:
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